Jamenei habló en un video emitido por la televisora estatal iraní. Era su primera aparición desde el 19 de junio, y tenía un aspecto y un tono más cansado que hace apenas una semana.
El ayatolá dijo a los espectadores que Washington solo se implicó en la guerra porque "sentía que si no intervenía, el régimen sionista quedaría completamente destruido".
Estados Unidos "no ha obtenido ningún beneficio de esta guerra", agregó.
"La República Islámica salió victoriosa y, en represalia, dio una cachetada en el rostro a Estados Unidos", afirmó en una aparente referencia a los misiles lanzados el lunes por Irán contra una base estadounidense en Qatar el lunes, que no causaron víctimas.
Jamenei advirtió que "esta acción puede repetirse también en el futuro" y apuntó que la República Islámica tiene "acceso a centros clave de Estados Unidos en la región y puede tomar medidas cuando lo considere necesario".
"Si se produce alguna agresión, el enemigo pagará, sin duda, un alto precio", declaró.
Jamenei, de 86 años, no ha sido visto en público desde que se refugió en un lugar secreto tras el inicio del conflicto el 13 de junio, cuando Israel atacó instalaciones nucleares iraníes y a altos mandos militares y científicos.
Tras el masivo ataque de Estados Unidos el 22 de junio, que alcanzó instalaciones nucleares con bombas antibúnker, Donald Trump ayudó a negociar un alto el fuego que entró en vigor el martes.
En la grabación del jueves, aparecía sentado delante de unas cortinas marrones lisas para dar su discurso, igual que en el del día 19.